MRNIP Plasmide Double Nickase (h): sc-412131-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRNIP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MRNIP Double Nickase Plasmid (h) e il MRNIP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MRNIP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRNIP Antibody (H-11): sc-390012
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRNIP Plasmide Double Nickase (h) | sc-412131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRNIP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MRNIP (proteina interagente con MRE11-RAD50-NBS1) è un fattore nucleare implicato nella risposta al danno al DNA attraverso un’associazione funzionale con il complesso MRN, che coordina il riconoscimento e la processazione delle rotture a doppio filamento del DNA. Modulando la segnalazione dipendente da MRN e la dinamica della resezione delle estremità, MRNIP contribuisce alla stabilità del genoma in condizioni di stress replicativo e influenza l’attivazione dei checkpoint e la scelta della via di riparazione. L’alterazione dei componenti della via MRN è ampiamente associata a fenotipi di instabilità cromosomica e a una sensibilità modificata agli agenti genotossici, rendendo MRNIP un nodo utile per lo studio dell’organizzazione delle reti di riparazione del DNA. La ricerca su MRNIP è pertinente ai meccanismi alla base dell’accumulo di mutazioni, dell’aneuploidia e dei difetti del ciclo cellulare osservati in diversi contesti patologici.
MRNIP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MRNIP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MRNIP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MRNIP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MRNIP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.