Mnt Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421684

Panoramica

Mnt (repressore trascrizionale della rete Max) è un fattore basic helix–loop–helix con cerniera a leucine che forma eterodimeri con MAX per legarsi agli elementi E-box e reprimere la trascrizione, controbilanciando l’attivazione genica guidata da MYC. Nelle cellule murine, Mnt contribuisce a coordinare la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione, il metabolismo e le risposte allo stress attraverso la regolazione dei bersagli della rete MYC/MAX e dei complessi corepressori associati alla cromatina. Limitando i programmi trascrizionali proliferativi e influenzando le vie della biogenesi mitocondriale e dei ribosomi, Mnt sostiene l’omeostasi cellulare in presenza di stimoli mitogenici. Un’alterazione dell’attività di MNT o uno squilibrio della rete MYC–MAX–MNT è stata collegata a una deregolazione del controllo della crescita e alla biologia tumorale, rendendola rilevante per studi meccanicistici dei circuiti trascrizionali oncogenici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mnt (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mnt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mnt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mnt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mnt.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mnt per lo studio della segnalazione di Mnt, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mnt critici per la funzione di Mnt
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mnt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mnt CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mnt CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mnt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mnt Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mnt (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mnt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mnt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.