MMP-13 Plasmide Double Nickase (h): sc-400626-NIC

MMP13 codifica la metalloproteinasi della matrice 13 (MMP-13), un’endopeptidasi secreta zinco-dipendente che degrada i collageni fibrillari e altri substrati della matrice extracellulare durante il rimodellamento tissutale. La sua attività è regolata dall’attivazione del propeptide, dagli inibitori tissutali delle metalloproteinasi (TIMP) e da input di segnalazione provenienti da vie di citochine e fattori di crescita, come MAPK e NF-κB, che coordinano i programmi infiammatori e di rimodellamento. Un’espressione aberrante di MMP-13 contribuisce al turnover della matrice extracellulare, a un’alterata segnalazione cellula–matrice e a fenotipi invasivi rilevanti per l’osteoartrosi, l’artrite reumatoide, la fibrosi e il rimodellamento del microambiente tumorale. Come indicatore e al tempo stesso promotore della dinamica della matrice, MMP-13 è ampiamente utilizzata per studiare il catabolismo del collagene, la biologia dei condrociti e le interazioni stroma–epitelio.

MMP-13 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MMP13 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MMP13. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MMP13. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MMP13 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.