MLL3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-437348-ACT

Kmt2c codifica la metiltransferasi istonica lisina‑N MLL3 del topo, un regolatore della cromatina con dominio SET che deposita la monometilazione di H3K4 sugli enhancer e contribuisce a coordinare la comunicazione enhancer–promotore. MLL3 opera in grandi complessi coattivatori della trascrizione con ruoli nella specificazione di linea cellulare, nella segnalazione dei recettori ormonali e nella regolazione dei geni dello sviluppo. Attraverso la modulazione dell’attività degli enhancer, influenza vie che controllano le decisioni di destino cellulare, la differenziazione e l’omeostasi tissutale. La deregolazione degli stati della cromatina e dei programmi trascrizionali associati a KMT2C/MLL3 è implicata in fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi processi di sviluppo alterati e riprogrammazione oncogenica della trascrizione.

MLL3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Kmt2c senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MLL3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Kmt2c nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Kmt2c, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MLL3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Kmt2c nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MLL3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MLL3 nelle cellule tumorali con espressione di Kmt2c silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.