MISR II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402523

Panoramica

AMHR2 codifica il recettore umano di tipo 2 dell’ormone anti‑Mülleriano (MISR II), una chinasi transmembrana serina/treonina che lega l’AMH e avvia la segnalazione tramite SMAD1/5/8 per regolare programmi di sviluppo nel dotto di Müller e la differenziazione gonadica. L’attivazione del recettore coordina risposte trascrizionali coinvolte nelle decisioni di destino cellulare, nel rimodellamento tissutale e nella maturazione del tratto riproduttivo, integrandosi con le dinamiche più ampie della via TGF‑β/BMP. Una segnalazione AMH–AMHR2 deregolata è stata associata a disturbi dello sviluppo sessuale e a fenotipi di endocrinologia riproduttiva; inoltre, l’espressione alterata di MISR II è stata studiata in contesti tumorali di origine ovarica e di altre linee cellulari di derivazione mülleriana. In quanto nodo di questa via, AMHR2 è utile per indagare la segnalazione recettoriale dipendente dal ligando, la regolazione genica mediata da SMAD e risposte di crescita e differenziazione specifiche del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MISR II (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AMHR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AMHR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AMHR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MISR II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AMHR2 per lo studio della segnalazione di MISR II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AMHR2 critici per la funzione di MISR II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AMHR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MISR II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MISR II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AMHR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MISR II Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MISR II (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AMHR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AMHR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.