MGAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-414091

Panoramica

Il gene umano **MOGAT1** codifica la **monoacilglicerolo O-aciltransferasi 1 (MGAT1)**, un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza l’acilazione del monoacilglicerolo per formare diacilglicerolo, un intermedio chiave nella biosintesi dei triacilgliceroli. Controllando l’equilibrio tra monoacilglicerolo, diacilglicerolo e i pool lipidici a valle, MGAT1 contribuisce alla formazione delle goccioline lipidiche e, più in generale, all’omeostasi dei lipidi cellulari. Un’attività alterata di MGAT1 è stata collegata a fenotipi metabolici, tra cui un’accumulazione lipidica epatica deregolata e alterazioni della segnalazione insulinica, ed è studiata nel contesto della steatosi associata all’obesità e delle relative vie di stress infiammatorio. Queste funzioni rendono MOGAT1 un bersaglio rilevante per indagare il rimodellamento del metabolismo lipidico e la regolazione organo-specifica dell’accumulo di lipidi neutri.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MGAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MOGAT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MOGAT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MOGAT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MGAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MOGAT1 per lo studio della segnalazione di MGAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MOGAT1 critici per la funzione di MGAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MOGAT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MGAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MGAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MOGAT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MGAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MGAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MOGAT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MOGAT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.