Plasmide CRISPR/Cas9 KO MGAT1 (h): sc-414091

Présentation

Le gène humain **MOGAT1** code la **monoacylglycérol O-acyltransférase 1 (MGAT1)**, une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse l’acylation du monoacylglycérol pour former du diacylglycérol, un intermédiaire clé de la biosynthèse des triacylglycérols. En contrôlant l’équilibre entre monoacylglycérol, diacylglycérol et les pools lipidiques en aval, MGAT1 contribue à la formation des gouttelettes lipidiques et, plus largement, à l’homéostasie lipidique cellulaire. Une activité altérée de MGAT1 a été associée à des phénotypes métaboliques, notamment une accumulation lipidique hépatique dérégulée et des perturbations de la signalisation de l’insuline, et elle est étudiée dans le contexte de la stéatose liée à l’obésité et des voies de stress inflammatoire associées. Ces fonctions font de **MOGAT1** une cible pertinente pour l’étude du remodelage du métabolisme lipidique et de la régulation, spécifique aux organes, du stockage des lipides neutres.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MGAT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MOGAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MOGAT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MOGAT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MGAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MOGAT1 pour l'étude de la signalisation de MGAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MOGAT1 essentiels à la fonction de MGAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MOGAT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MGAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MGAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MOGAT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MGAT1 plasmide HDR (h) et le MGAT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MOGAT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MOGAT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.