METT10D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408605

Panoramica

La proteina umana METTL16 (METT10D) codifica una metiltransferasi dell’RNA dipendente dalla S-adenosil-L-metionina che installa la N6-metiladenosina (m6A) su substrati di RNA con struttura definita, collegando la modifica dell’RNA al controllo del metabolismo dell’RNA. La metilazione mediata da METTL16 può influenzare lo splicing del pre-mRNA, la stabilità dell’RNA e la traduzione attraverso effetti sulla struttura dell’RNA e sull’assemblaggio dei ribonucleoproteici, ed è stata collegata alla regolazione dell’omeostasi cellulare dei donatori di metile tramite il processamento del trascritto MAT2A. Attraverso queste funzioni, METTL16 partecipa a programmi di espressione genica che modellano la crescita cellulare e l’adattamento allo stress, rendendola rilevante per studi sulla regolazione epitranscrittomica in contesti di sviluppo e di malattia. Un’alterata attività di METTL16 è stata implicata in un’elaborazione dell’RNA deregolata e in fenotipi di segnalazione proliferativa osservati in molteplici modelli di ricerca oncologica e neurobiologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO METT10D (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene METTL16 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del METTL16 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto METTL16 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina METT10D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di METTL16 per lo studio della segnalazione di METT10D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni METTL16 critici per la funzione di METT10D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di METTL16 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal METT10D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal METT10D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus METTL16. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal METT10D Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR METT10D (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia METTL16 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio METTL16 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.