Metallothionein 1F Plasmide Double Nickase (h): sc-417937-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Metallothionein 1F Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h) e il Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MT1F. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Metallothionein 1F Plasmide Double Nickase (h) | sc-417937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Metallothionein 1F Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MT1F codifica la metallotioneina 1F, una proteina a basso peso molecolare, ricca di cisteina e legante metalli, che contribuisce all’omeostasi intracellulare dei metalli essenziali in tracce come zinco e rame e al sequestro di metalli tossici, inclusi cadmio e mercurio. Tamponando le riserve labili di zinco, MT1F può influenzare l’equilibrio redox, l’attività di enzimi dipendenti dai metalli e programmi trascrizionali responsivi allo stress ossidativo ed elettrofilo. I membri della famiglia delle metallotioneine sono comunemente associati a vie di adattamento allo stress cellulare e possono modulare la sensibilità all’esposizione ai metalli e alle specie reattive dell’ossigeno attraverso una chimica redox basata sui gruppi tiolici. Un’espressione alterata di MT1F è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi cambiamenti associati al cancro nel metabolismo dei metalli e nella segnalazione dello stress ossidativo, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle risposte allo stress e sulla biologia della detossificazione.
Metallothionein 1F Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MT1F nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MT1F. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MT1F. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MT1F interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.