MELK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403062-LAC

La chinasi con cerniera a leucina embrionale materna (MELK) è una chinasi serina/treonina coinvolta nella regolazione della progressione del ciclo cellulare, dei checkpoint mitotici e degli stati cellulari di tipo progenitore. La segnalazione di MELK interagisce con le vie che governano la proliferazione e l’adattamento allo stress ed è stata collegata al controllo di programmi trascrizionali che supportano la crescita e la sopravvivenza cellulare. Un’espressione deregolata di MELK è osservata frequentemente in molteplici tipi di tumore ed è associata a fenotipi aggressivi, rendendola un bersaglio comune per lo studio delle reti di segnalazione oncogeniche. Nei modelli cellulari umani, MELK viene utilizzata per indagare il controllo, dipendente dalle chinasi, di divisione, differenziamento e fitness cellulare in condizioni di stress replicativo o genotossico.

Le particelle di attivazione lentivirale MELK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MELK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MELK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MELK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MELK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MELK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.