MEK-5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401688-LAC

MAP2K5 codifica MEK-5, una chinasi MAPK a doppia specificità che agisce a monte di ERK5 (MAPK7) per trasmettere segnali extracellulari in programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento, sopravvivenza cellulare e risposte allo stress. L’attivazione di MEK-5 integra segnali provenienti da fattori di crescita e dallo stress cellulare per regolare effettori nucleari, inclusi i fattori di trascrizione della famiglia MEF2, modellando così il rimodellamento del citoscheletro e fenotipi associati alla migrazione. La disregolazione dell’asse MEK5–ERK5 è stata collegata ad alterazioni della segnalazione di crescita e a un comportamento invasivo in molteplici contesti patologici, rendendo MAP2K5 un bersaglio frequente negli studi di mappatura delle vie di segnalazione e di genomica funzionale. In quanto chinasi nodale nelle cascate MAPK, MEK-5 rappresenta uno strumento maneggevole per analizzare il crosstalk della segnalazione e i cambiamenti dell’espressione genica a valle nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MEK-5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MAP2K5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MEK-5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MAP2K5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MEK-5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MAP2K5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.