Meis2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421710-ACT

MEIS2 (Meis homeobox 2) è un fattore di trascrizione con dominio omeotico della classe TALE che coopera con le proteine PBX e HOX per regolare l’attività degli enhancer e programmi di espressione genica specifici di linea durante lo sviluppo embrionale. Nel topo, Meis2 contribuisce al patterning e alla differenziazione dei derivati della cresta neurale, alla morfogenesi craniofacciale, allo sviluppo degli arti e del cuore e alla maturazione di specifiche popolazioni neuronali, integrando segnali provenienti da reti di segnalazione dello sviluppo quali l’acido retinoico e circuiti trascrizionali regolati da HOX. Controllando la specificazione del destino cellulare e i processi morfogenetici, un dosaggio alterato di MEIS2 o un output trascrizionale deregolato è rilevante per fenotipi congeniti dello sviluppo e per la biologia del neurosviluppo. Meis2 è pertanto frequentemente studiato in modelli di differenziamento, organogenesi e architettura delle reti trascrizionali.

Meis2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Meis2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Meis2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Meis2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Meis2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Meis2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Meis2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Meis2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Meis2 nelle cellule tumorali con espressione di Meis2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.