MCM3AP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406369

Panoramica

MCM3AP (proteina associata a MCM3) è un fattore nucleare multifunzionale che interagisce con il complesso elicasi MCM2–7 e contribuisce alla regolazione della replicazione del DNA e della progressione del ciclo cellulare. È stata collegata a processi che coordinano la “licenza” della replicazione con il controllo trascrizionale e il metabolismo dell’RNA, riflettendo ruoli nella manutenzione del genoma e nella capacità proliferativa. L’alterazione o la deregolazione dell’espressione di MCM3AP è stata studiata nel contesto dello stress replicativo, della segnalazione associata alla cromatina e delle risposte cellulari al danno al DNA che influenzano la stabilità genomica. Questi meccanismi sono spesso indagati nella biologia del cancro e in altri disturbi proliferativi, in cui i conflitti tra replicazione e trascrizione e la disfunzione dei checkpoint rappresentano temi di ricerca centrali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM3AP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCM3AP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCM3AP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCM3AP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCM3AP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCM3AP per lo studio della segnalazione di MCM3AP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MCM3AP critici per la funzione di MCM3AP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCM3AP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCM3AP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCM3AP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCM3AP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCM3AP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCM3AP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCM3AP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCM3AP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.