MC1-R Plasmide Double Nickase (h): sc-402152-NIC

MC1R codifica il recettore della melanocortina 1 (MC1-R), un recettore accoppiato a proteine G espresso prevalentemente nei melanociti, che regola la pigmentazione e le risposte cellulari allo stress. In seguito al legame con peptidi melanocortinici come l’α-MSH, MC1-R attiva la via di segnalazione Gs/adenilato ciclasi aumentando i livelli di cAMP, promuovendo la trascrizione dipendente da MITF e orientando la melanogenesi verso la produzione di eumelanina. Questa via si integra con le risposte al danno del DNA indotto dai raggi UV e con l’omeostasi redox, influenzando la sopravvivenza dei melanociti e la segnalazione infiammatoria nella cute. Le varianti genetiche e le alterazioni dell’attività di MC1R sono associate a fenotipi di pigmentazione e a una maggiore suscettibilità a patologie cutanee correlate ai raggi UV, rendendo questo locus ampiamente utilizzato negli studi meccanicistici di biologia dei melanociti e fotobiologia.

MC1-R Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MC1R nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MC1R. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MC1R. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MC1R interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.