Matrilin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404852

Panoramica

MATN2 codifica la matrilina-2, una glicoproteina adattatrice multidominio della matrice extracellulare (ECM) che partecipa all’assemblaggio e alla stabilizzazione di reti filamentose fungendo da ponte tra collagene, proteoglicani e altri costituenti della matrice. La matrilina-2 sostiene l’architettura tissutale e la comunicazione cellula–matrice, che influenzano adesione, migrazione e meccanotrasduzione, processi strettamente legati ai programmi di rimodellamento della ECM. Grazie al suo ruolo nell’organizzazione della matrice, MATN2 è rilevante per studi di biologia muscoloscheletrica e del tessuto connettivo, nonché in contesti più ampi in cui la composizione della ECM modula l’infiammazione e la riparazione delle ferite. Un’omeostasi della ECM deregolata che coinvolge MATN2 è stata associata a rimodellamento patologico e a fenotipi simili alla fibrosi in molteplici tessuti, motivando indagini meccanicistiche in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MATN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MATN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MATN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Matrilin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MATN2 per lo studio della segnalazione di Matrilin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MATN2 critici per la funzione di Matrilin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MATN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Matrilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Matrilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MATN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Matrilin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Matrilin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MATN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MATN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.