MATH-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419230

Panoramica

Atoh1 (MATH-1) è un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che, durante lo sviluppo del topo, agisce come regolatore determinante di linea cellulare, guidando programmi di differenziamento neuronale e delle cellule sensoriali. Integra segnali morfogenetici e di segnalazione a monte, inclusi l’inibizione laterale mediata da Notch e i segnali di patterning associati a Wnt, per coordinare l’impegno del destino cellulare e la maturazione. L’attività di Atoh1 è fondamentale per la specificazione e il mantenimento delle cellule ciliate meccanosensoriali e di diverse popolazioni di progenitori neuronali, collegandolo a vie che controllano le transizioni dalla proliferazione alla differenziazione. Un’espressione o una funzione deregolata di Atoh1 è stata associata a traiettorie di neurosviluppo alterate e a stati di differenziamento aberranti rilevanti per la modellizzazione di malattie nei tessuti in cui Atoh1 governa la competenza dei progenitori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MATH-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atoh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atoh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atoh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MATH-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atoh1 per lo studio della segnalazione di MATH-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atoh1 critici per la funzione di MATH-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atoh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MATH-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MATH-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atoh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MATH-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MATH-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atoh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atoh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.