Mast Cell Tryptase Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400887-ACT

TPSAB1 codifica la triptasi dei mastociti (triptasi-α/β), una proteasi serinica secreta che viene immagazzinata nei granuli dei mastociti e rilasciata durante la degranulazione. La triptasi mastocitaria partecipa al rimodellamento proteolitico della matrice extracellulare e può trasmettere segnali attraverso i recettori attivati da proteasi, modulando le cascate infiammatorie, il reclutamento dei leucociti e la permeabilità vascolare. Influenzando le reti citochiniche e la dinamica del microambiente tissutale, TPSAB1 è comunemente utilizzato come marcatore di attivazione e abbondanza dei mastociti in immunologia e nella biologia dei tessuti di barriera. Alterazioni dell’attività della triptasi mastocitaria e dei pattern di infiltrazione dei mastociti sono oggetto di studio nell’allergia, nell’asma, nei disturbi infiammatori cronici, nei processi associati alla fibrosi e nell’infiammazione associata ai tumori.

Mast Cell Tryptase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TPSAB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mast Cell Tryptase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TPSAB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TPSAB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mast Cell Tryptase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TPSAB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mast Cell Tryptase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mast Cell Tryptase nelle cellule tumorali con espressione di TPSAB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.