MASP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403583-ACT

MASP1 codifica la serina proteasi 1 legata alla lectina legante il mannosio (MASP-1), una proteasi iniziatrice chiave della via lectinica del complemento. Dopo il riconoscimento dei carboidrati microbici da parte di molecole di riconoscimento di pattern come MBL e le ficoline, MASP-1 promuove eventi di attivazione proteolitica che amplificano la segnalazione del complemento e si intersecano con le cascate della coagulazione e dell’infiammazione. Attraverso la scissione di substrati a valle e la modulazione delle risposte di endotelio e leucociti, MASP-1 contribuisce a coordinare la difesa immunitaria innata e la sorveglianza dei tessuti. Un’attività deregolata della via lectinica e un’espressione alterata di MASP1 sono state associate a patobiologia infiammatoria e vascolare, offrendo un punto di ingresso meccanicistico per studiare, nei sistemi umani, i processi patologici guidati dal complemento.

MASP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MASP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MASP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MASP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MASP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MASP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MASP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MASP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MASP-1 nelle cellule tumorali con espressione di MASP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.