MARCH5 Plasmide Double Nickase (h): sc-404655-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARCH5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MARCH5 Double Nickase Plasmid (h) e il MARCH5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MARCH5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARCH5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARCH5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH5 (noto anche come MITOL) è una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING localizzata sulla membrana mitocondriale esterna, che regola il controllo di qualità delle proteine mitocondriali e la dinamica dell’organello. Ubiquitinando substrati coinvolti nell’equilibrio fusione–fissione dei mitocondri e nella segnalazione da stress, MARCH5 influenza processi quali mitofagia, apoptosi e la risposta cellulare integrata alla disfunzione mitocondriale. Interagisce con le vie ubiquitina–proteasoma e con le reti dell’omeostasi mitocondriale che modellano l’equilibrio redox e l’adattamento bioenergetico. In letteratura, un’attività o un’espressione disregolata di MARCH5 è stata associata ad alterazioni della morfologia mitocondriale e a una maggiore suscettibilità allo stress in contesti rilevanti per la neurodegenerazione e per il metabolismo delle cellule tumorali.
MARCH5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MARCH5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MARCH5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MARCH5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MARCH5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.