MAL Plasmide Double Nickase (h2): sc-403024-NIC-2

Il gene umano MAL codifica la proteina della mielina e dei linfociti, un componente di membrana tetraspan altamente idrofobico, arricchito in microdomini di membrana ricchi di glicolipidi e colesterolo, che aiuta a organizzare lo smistamento apicale e il traffico vescicolare negli epiteli polarizzati e contribuisce all’organizzazione dei proteolipidi nelle cellule mielinizzanti. MAL partecipa a processi di trasporto dipendenti dai raft di membrana e influenza il riciclo endocitico e la compartimentalizzazione dei segnali, collegandosi così al mantenimento della polarità epiteliale e alla formazione di domini di membrana specializzati. Un’alterata espressione di MAL o il suo silenziamento epigenetico sono stati riportati in molteplici tumori e in contesti di demielinizzazione e di funzione delle cellule immunitarie, rendendolo un marcatore utile per studiare la differenziazione di linea, i difetti del traffico di membrana e la biologia tumorale. L’editing genetico di MAL consente indagini meccanicistiche delle vie di trasporto associate ai raft, della regolazione della polarità cellulare e degli effetti specifici del contesto su proliferazione, migrazione e dinamiche di membrana correlate alla mielina in sistemi modello umani.

MAL Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.