MafB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400554-ACT

MAFB codifica MafB, un fattore di trascrizione bZIP della famiglia delle “large Maf” che si lega agli elementi di riconoscimento Maf per controllare programmi trascrizionali specifici di linea cellulare. Nei tessuti umani è un regolatore chiave della differenziazione mieloide e dei macrofagi, della modulazione dell’espressione di geni infiammatori e del mantenimento di stati cellulari specializzati, inclusi l’identità dei podociti renali e la funzione delle isole pancreatiche. MafB integra segnali provenienti da vie di sviluppo e da vie responsabili allo stress per coordinare la differenziazione terminale, la maturazione cellulare e l’omeostasi tissutale. Un’espressione o un’attività deregolata di MAFB è stata associata a fenotipi immunitari e infiammatori, a disfunzione glomerulare renale e ad alterazioni dei programmi di differenziazione cellulare rilevanti per la biologia dei tumori.

MafB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAFB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MafB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAFB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAFB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MafB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAFB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MafB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MafB nelle cellule tumorali con espressione di MAFB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.