mAChR M5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402943-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mAChR M5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mAChR M5 Double Nickase Plasmid (h) e il mAChR M5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHRM5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mAChR M5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402943-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM5 codifica il recettore muscarinico dell’acetilcolina umano M5 (mAChR M5), un recettore accoppiato a proteine G che attiva principalmente la segnalazione Gq/11 per stimolare la fosfolipasi C, la produzione di inositolo trifosfato/diacilglicerolo, la mobilizzazione intracellulare di Ca²⁺ e l’attività a valle delle vie PKC e MAPK. Attraverso queste cascate, M5 può modulare l’eccitabilità neuronale, la segnalazione sinaptica e le risposte neurovascolari, influenzando anche processi secretori e della muscolatura liscia in modo dipendente dal tipo cellulare. L’espressione di CHRM5 e le dinamiche della segnalazione colinergica sono spesso studiate nel contesto della regolazione dei circuiti dopaminergici, della neuroinfiammazione e di fenotipi comportamentali rilevanti per l’uso di sostanze e per altre aree di ricerca neuropsichiatrica.
mAChR M5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRM5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRM5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRM5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRM5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.