mAChR M1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401453-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mAChR M1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h) e il mAChR M1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHRM1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mAChR M1 Antibody (G-9): sc-365966
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mAChR M1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM1 codifica il recettore muscarinico dell’acetilcolina M1 umano (mAChR M1), un recettore accoppiato a proteine G che segnala principalmente attraverso Gq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, aumentare il Ca²⁺ intracellulare e stimolare programmi trascrizionali dipendenti da PKC. mAChR M1 modula l’eccitabilità neuronale, la plasticità sinaptica e la regolazione colinergica dei circuiti corticali e ippocampali, con ulteriori ruoli nella muscolatura liscia periferica e nei tessuti secretori. L’attivazione a valle delle vie MAPK/ERK e della segnalazione associata a PI3K collega l’attività di CHRM1 a cambiamenti nell’espressione genica, nel metabolismo cellulare e nelle dinamiche di desensibilizzazione/internalizzazione del recettore. La disregolazione della segnalazione colinergica che coinvolge CHRM1 è stata studiata nel contesto di fenotipi cognitivi e neuropsichiatrici, nonché di alterazioni più ampie delle vie dei GPCR osservate in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
mAChR M1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRM1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.