LST1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421476

Panoramica

Lst1 codifica il leukocyte specific transcript 1 (LST1), una piccola proteina immunoregolatoria associata alla membrana, arricchita nelle linee mieloidi come monociti, macrofagi e microglia. LST1 contribuisce a modulare l’attivazione delle cellule dell’immunità innata, la migrazione e la comunicazione cellula–cellula, con collegamenti riportati a reti di segnalazione associate a ITAM, al rimodellamento del citoscheletro e a programmi trascrizionali infiammatori. Nei tessuti murini, l’espressione di Lst1 correla con stati di macrofagi e microglia ed è comunemente utilizzata come marcatore di infiltrazione immunitaria e di attivazione mieloide. Alterazioni di firme mieloidi associate a LST1 sono state osservate in diversi contesti infiammatori e neuroinfiammatori e nei microambienti immunitari tumorali, supportando studi meccanicistici sulla regolazione immunitaria e su fenotipi mieloidi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LST1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lst1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lst1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lst1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LST1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lst1 per lo studio della segnalazione di LST1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lst1 critici per la funzione di LST1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lst1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lst1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LST1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LST1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lst1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lst1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.