LSm1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403980-ACT

LSM1 umano codifica LSm1, una proteina legante l’RNA di tipo Sm-like che si assembla nel complesso citoplasmatico LSM1–7 per regolare il turnover dell’mRNA. LSm1 promuove la degradazione dell’mRNA da 5′ a 3′ favorendo il decapping e coordinandosi con i P-bodies, contribuendo così a definire la stabilità dei trascritti e programmi di espressione genica legati alla proliferazione e alle risposte allo stress. Attraverso il suo ruolo nel controllo post-trascrizionale, un’alterata attività di LSM1 può influenzare vie connesse alla trasformazione oncogenica e a una regolazione anomala del metabolismo dell’RNA, rendendolo rilevante per studi meccanicistici su stati di espressione genica associati a malattia. LSm1 è inoltre utilizzata come marcatore e nodo funzionale per indagare difetti nel processamento dell’RNA e i loro effetti a valle sul comportamento cellulare.

LSm1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LSM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LSm1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LSM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LSM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LSm1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LSM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LSm1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LSm1 nelle cellule tumorali con espressione di LSM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.