Lsh Plasmide Double Nickase (h): sc-402466-NIC

HELLS codifica Lsh (elicasi specifica dei tessuti linfoidi), un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente della famiglia SNF2 che supporta il mantenimento della metilazione del DNA e la formazione dell’eterocromatina facilitando l’accesso delle DNMT e di altri regolatori epigenetici al DNA nucleosomiale. Lsh contribuisce all’assemblaggio della cromatina accoppiato alla replicazione, alla repressione trascrizionale degli elementi ripetitivi e alla preservazione della stabilità del genoma attraverso effetti sulla compattazione della cromatina e su processi associati alla riparazione del DNA. La disregolazione di HELLS è stata collegata a pattern aberranti di metilazione del DNA, a un controllo alterato del ciclo cellulare e a fenotipi di instabilità genomica osservati in disturbi dello sviluppo e in studi sul rimodellamento epigenetico associato al cancro. In quanto fattore nucleare della cromatina, Lsh è spesso studiato in vie che collegano l’ereditarietà epigenetica, il silenziamento dei trasposoni e le risposte allo stress replicativo.

Lsh Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HELLS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HELLS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HELLS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HELLS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.