LSD1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430289-LAC

Il gene murino **Kdm1a** codifica la lisina-demethylasi specifica 1A (LSD1), un regolatore della cromatina dipendente da FAD che rimuove i segni di mono- e di-metilazione dagli istoni H3K4 e H3K9 per modulare i programmi trascrizionali. LSD1 opera in complessi repressivi e attivatori come CoREST e NuRD, integrandosi con il controllo della RNA polimerasi II, la dinamica degli enhancer e le reti di fattori di trascrizione specifici di linea per regolare la differenziazione, la progressione del ciclo cellulare e lo stato metabolico. Attraverso queste vie epigenetiche, Kdm1a influenza lo sviluppo ematopoietico e neurale e contribuisce a circuiti trascrizionali aberranti rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi neuroevolutivi. Il suo ruolo centrale nel rimodellamento della cromatina rende Kdm1a un nodo chiave per lo studio del controllo epigenetico dell’espressione genica nei modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale LSD1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Kdm1a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LSD1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Kdm1a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LSD1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Kdm1a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.