Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) LSD1: sc-401294-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LSD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LSD1 (h) y el plásmido de doble nickasa LSD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KDM1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LSD1 Anticuerpo (B-9): sc-271720
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LSD1 | sc-401294-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LSD1 | sc-401294-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM1A codifica la desmetilasa 1 específica de lisina (LSD1), una aminooxidasa dependiente de FAD que elimina marcas mono- y di-metiladas de la histona H3 (principalmente H3K4 y, según el contexto, H3K9) para modular la accesibilidad de la cromatina y los programas de transcripción. LSD1 funciona dentro de complejos correpresores y de remodelación de la cromatina como CoREST y NuRD, vinculando la desmetilación de histonas con la metilación del ADN, la regulación de potenciadores (enhancers) y la expresión génica específica de linaje. A través de estos mecanismos epigenéticos, LSD1 influye en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y el mantenimiento de estados tipo célula madre. La actividad desregulada de KDM1A y los cambios en la composición de los complejos de LSD1 se han asociado con un control transcripcional aberrante en múltiples cánceres y otros trastornos que implican una desregulación epigenética.
LSD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KDM1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KDM1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KDM1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KDM1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.