LRRK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402602-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LRRK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LRRK2 Double Nickase Plasmid (h) e il LRRK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LRRK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LRRK2 Antibody (133AT1218): sc-130159
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LRRK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402602-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRRK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402602-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRRK2 umano codifica la leucine-rich repeat kinase 2, una chinasi multifunzionale serina/treonina e GTPasi che integra la segnalazione sulle membrane endolisosomiali e coinvolte nel traffico vescicolare. LRRK2 modula la fosforilazione delle GTPasi Rab, la dinamica del citoscheletro e la funzione della via autofagia–lisosoma, influenzando così l’omeostasi degli organelli e la segnalazione infiammatoria. Un’attività di LRRK2 deregolata e specifiche varianti sono fortemente associate alla biologia del morbo di Parkinson e sono studiate anche nelle vie immunitarie e nella neuroinfiammazione. In quanto regolatore centrale del traffico di membrana e della proteostasi, LRRK2 è ampiamente utilizzata per indagare le risposte allo stress e i meccanismi di vulnerabilità neuronale in modelli cellulari umani.
LRRK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LRRK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LRRK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LRRK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LRRK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.