LRP6 Plasmide Double Nickase (m): sc-421466-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LRP6 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LRP6 Double Nickase Plasmid (m) e il LRP6 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lrp6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LRP6 Antibody (C-10): sc-25317
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LRP6 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP6 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Lrp6* codifica la lipoproteina 6 correlata al recettore delle LDL (LRP6), un co-recettore a singolo passaggio di membrana essenziale per la segnalazione canonica Wnt/β-catenina. In seguito al legame del ligando Wnt, LRP6 partecipa all’assemblaggio del signalosoma insieme ai recettori Frizzled, promuovendo la stabilizzazione della β-catenina e i programmi trascrizionali a valle che regolano il patterning embrionale, il comportamento delle cellule staminali e progenitrici e l’omeostasi tissutale. L’attività di LRP6 interseca inoltre vie che controllano la polarità cellulare e il traffico dei recettori, modulando output di segnalazione dipendenti dal contesto. Una segnalazione Wnt dipendente da LRP6 deregolata è stata collegata ad anomalie dello sviluppo e a un rimodellamento tissutale alterato in molteplici modelli rilevanti per la malattia, rendendo *Lrp6* un nodo frequentemente studiato nella biologia delle vie di segnalazione.
LRP6 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lrp6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lrp6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lrp6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lrp6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.