Plásmido CRISPR de Activación (h) LRP4: sc-401708-ACT

LRP4 (proteína 4 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad) es un receptor transmembrana de paso único que funciona como un organizador clave de la señalización de ligandos extracelulares en la superficie celular. En tejidos humanos, LRP4 participa en redes de señalización mediadas por Wnt y agrina que regulan la organización de las sinapsis, la agrupación de receptores y el patrón tisular, respaldando procesos como la formación de la unión neuromuscular y la homeostasis esquelética. Mediante interacciones con ligandos secretados y correceptores, LRP4 influye en programas transcripcionales aguas abajo que controlan la comunicación célula–célula y la señalización del desarrollo. La expresión o función desregulada de LRP4 se ha vinculado a fenotipos neuromusculares y relacionados con el hueso, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la señalización sináptica y la biología musculoesquelética.

LRP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRP4 en células tumorales con expresión de LRP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.