LI-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419592

Panoramica

Cdh17 codifica la LI-caderina, una molecola di adesione cellula-cellula calcio-dipendente della superfamiglia delle caderine che contribuisce alla coesione e alla polarità dell’epitelio nei tessuti gastrointestinali ed epatobiliari. Attraverso l’adesione omofilica sulla superficie cellulare, la LI-caderina aiuta a organizzare l’architettura delle giunzioni, regola l’integrità della barriera e influenza il controllo, dipendente dal contatto, della migrazione e della differenziazione cellulare. Alterazioni dell’adesione mediata dalle caderine sono associate a rimodellamento epiteliale, displasia e fenotipi legati all’invasione, rendendo Cdh17 un valido punto di partenza per studiare la stabilità giunzionale durante l’infiammazione e la progressione associata ai tumori nel topo. Il suo pattern di espressione e la sua funzione adesiva ne supportano inoltre l’impiego come bersaglio associato a marcatori in studi sull’identità di linea epiteliale e sull’organizzazione tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdh17 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdh17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdh17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LI-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdh17 per lo studio della segnalazione di LI-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cdh17 critici per la funzione di LI-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdh17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdh17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LI-cadherin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LI-cadherin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdh17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdh17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.