Lck BP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420811

Panoramica

Hcls1 codifica nel topo la proteina substrato 1 di Lyn specifica delle cellule ematopoietiche (Lck BP-1), una proteina adattatrice arricchita nelle linee immunitarie che collega la segnalazione dei recettori dell’antigene al rimodellamento del citoscheletro. Attraverso interazioni dipendenti dalla fosforilazione con chinasi della famiglia Src e complessi che regolano l’actina, Lck BP-1 contribuisce al flusso di calcio indotto dagli immunorecettori, all’attivazione di MAPK e a cambiamenti dinamici nella forma cellulare e nella motilità. Questo nodo di segnalazione influenza l’attivazione dei linfociti, l’adesione e il trafficking, collegando gli eventi prossimali al recettore alle risposte trascrizionali a valle. La disregolazione delle vie associate a Hcls1 è rilevante per studi sulla segnalazione infiammatoria, sull’attivazione aberrante delle cellule immunitarie e sulla biologia delle cellule ematopoietiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck BP-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hcls1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hcls1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hcls1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lck BP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hcls1 per lo studio della segnalazione di Lck BP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hcls1 critici per la funzione di Lck BP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hcls1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hcls1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lck BP-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Lck BP-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hcls1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hcls1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.