Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
LAT Plasmide Double Nickase (m): sc-421389-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAT Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LAT Double Nickase Plasmid (m) e il LAT Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lat. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAT Antibody (11B.12): sc-53550
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAT Plasmide Double Nickase (m) | sc-421389-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse LAT (linker for activation of T cells) codifica una proteina adattatrice transmembrana che viene rapidamente fosforilata a valle dell’attivazione del recettore dei linfociti T, creando siti di docking per proteine di segnalazione contenenti domini SH2. LAT nuclea il signalosoma di LAT, collegando chinasi prossimali come LCK e ZAP70 all’attivazione di PLCγ1, al flusso di calcio, alla segnalazione Ras–MAPK e alle vie dipendenti da PI3K che controllano l’attivazione dei linfociti T, la differenziazione e la produzione di citochine. L’alterazione della segnalazione mediata da LAT modifica la formazione della sinapsi immunologica e la selezione dei linfociti T, e la disfunzione della via di LAT è associata a disregolazione immunitaria e a fenotipi linfoproliferativi in modelli sperimentali. In quanto snodo centrale della segnalazione immunitaria adattativa, LAT è ampiamente studiata nei meccanismi della tolleranza dei linfociti T, dell’infiammazione e della biologia delle malattie immunomediate.
LAT Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lat nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lat. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lat. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lat interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.