Plasmide CRISPR d'Activation (h) LAMP-2: sc-400215-ACT

LAMP2 code la protéine membranaire associée aux lysosomes 2 (LAMP-2), une glycoprotéine majeure de la membrane lysosomale, indispensable à la biogenèse et à l’intégrité des lysosomes. LAMP-2 soutient le flux autophagique et les voies de dégradation lysosomale, notamment la macroautophagie et l’autophagie médiée par des chaperonnes, influençant ainsi le renouvellement des protéines, des lipides et des organites endommagés. Par son rôle dans le trafic endolysosomal et les événements de fusion, LAMP-2 intervient dans les réponses au stress cellulaire, l’homéostasie métabolique et le traitement des antigènes. Une expression ou une fonction altérée de LAMP2 est liée à des phénotypes de surcharge lysosomale et à des perturbations de l’autophagie, et a été associée à la cardiomyopathie et à la myopathie squelettique observées dans la maladie de Danon, ainsi qu’à des mécanismes plus larges de maladies neurodégénératives et inflammatoires impliquant une clairance lysosomale déficiente.

LAMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LAMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LAMP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LAMP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LAMP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.