Lamin B2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421446-NIC

Lmnb2 nel topo codifica la lamina B2, un filamento intermedio fondamentale della lamina nucleare che fornisce supporto strutturale all’involucro nucleare e contribuisce a organizzare la cromatina periferica. La lamina B2 partecipa all’architettura del nucleo, alla tempistica della replicazione del DNA e alla riassemblaggio mitotico dell’involucro nucleare, collegando la dinamica della lamina alla progressione del ciclo cellulare e alla stabilità del genoma. Attraverso interazioni con i domini associati alla lamina, contribuisce alla regolazione trascrizionale e all’organizzazione della cromatina di ordine superiore. La disregolazione della lamina B2 e di componenti correlati della lamina è rilevante per le laminopatie e per meccanismi più generali di fragilità nucleare, alterazione dei programmi di espressione genica e risposte allo stress, studiati in contesti di sviluppo e degenerazione.

Lamin B2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lmnb2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lmnb2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lmnb2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lmnb2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.