KV6.3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413962

Panoramica

KCNG4 codifica la subunità Kv6.3, un membro elettricamente silente della famiglia dei canali del potassio voltaggio-dipendenti che modula l’eccitabilità di membrana formando eterotetrameri con le subunità α dei canali Kv2. Attraverso questo ruolo modulatore, Kv6.3 influenza la forma del potenziale d’azione, le soglie di scarica e la cinetica di ripolarizzazione, integrandosi nei processi di omeostasi ionica e di segnalazione associati all’eccitabilità. L’espressione di KCNG4 è stata riportata in tessuti eccitabili ed è rilevante per vie che regolano la segnalazione neuronale e sensoriale, nonché il comportamento elettrico della muscolatura liscia. La disregolazione dei modulatori dei canali del potassio è ampiamente implicata nei disturbi dell’eccitabilità, a sostegno di KCNG4 come bersaglio per studi meccanicistici sulla composizione e la funzione dei canali ionici in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KV6.3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNG4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNG4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNG4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KV6.3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNG4 per lo studio della segnalazione di KV6.3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNG4 critici per la funzione di KV6.3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNG4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KV6.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KV6.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNG4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KV6.3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KV6.3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNG4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNG4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.