KLF17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414317-ACT

KLF17 (Krüppel-like factor 17) è un fattore di trascrizione con domini a dita di zinco che regola i programmi di differenziazione epiteliale e le reti trascrizionali che controllano adesione cellulare, polarità e motilità. Modulando l’espressione genica tramite il legame a promotori ricchi in GC, KLF17 interagisce con vie associate alla plasticità epitelio-mesenchimale, al rimodellamento del citoscheletro e a output di segnalazione MAPK/PI3K dipendenti dal contesto. Un’espressione deregolata di KLF17 è stata associata a fenotipi invasivi alterati e alla capacità metastatica in diversi modelli tumorali, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici sulla progressione e sulle transizioni dello stato cellulare. Nelle cellule umane, l’attività di KLF17 viene comunemente analizzata in relazione ai circuiti di repressione/attivazione trascrizionale e alla regolazione di target a valle associati all’EMT.

KLF17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KLF17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KLF17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KLF17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KLF17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KLF17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KLF17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KLF17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KLF17 nelle cellule tumorali con espressione di KLF17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.