Keratin 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402077-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Keratin 2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h) e il Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KRT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Keratin 2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Keratin 2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT2 codifica la cheratina 2, una proteina dei filamenti intermedi di tipo II espressa prevalentemente nei cheratinociti soprastrati, dove eterodimerizza con le cheratine di tipo I per formare la rete citoscheletrica dell’epidermide. La cheratina 2 contribuisce alla resistenza meccanica, alla coesione cellula-cellula e alla corretta differenziazione durante la stratificazione epidermica, integrandosi con complessi giunzionali associati ai desmosomi e con il rimodellamento dei filamenti intermedi in risposta allo stress. Un’alterazione della funzione di KRT2 compromette l’organizzazione dei filamenti e l’integrità dell’epidermide, e varianti patogene sono associate a disturbi della cheratinizzazione, inclusa l’ittiosi epidermolitica superficiale. Poiché la dinamica dei filamenti di cheratina interseca vie che controllano la formazione della barriera, la cornificazione e le risposte allo stress meccanico o infiammatorio, KRT2 rappresenta un bersaglio utile per studiare l’omeostasi cutanea e la regolazione del citoscheletro.
Keratin 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.