KCTD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406758

Panoramica

KCTD1 (potassium channel tetramerization domain containing 1) codifica una proteina contenente un dominio BTB/POZ, implicata in reti di interazioni proteina–proteina che influenzano il controllo trascrizionale e i programmi di differenziamento cellulare. I membri della famiglia KCTD spesso agiscono come proteine adattatrici all’interno di complessi di ubiquitina-ligasi E3 basati su Cullin3 (CUL3), collegando specifici substrati al turnover mediato dall’ubiquitina e modellando così gli output di segnalazione. Attraverso questi ruoli regolatori, KCTD1 è stata associata a processi di sviluppo e al mantenimento dell’identità cellulare, e la sua alterazione genetica è stata collegata a disturbi congeniti che interessano i tessuti ectodermici. Nella ricerca biomedica, KCTD1 viene studiata nel contesto della modulazione delle vie di segnalazione, della proteostasi e dei circuiti regolatori dell’espressione genica rilevanti per fenotipi patologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCTD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCTD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCTD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCTD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCTD1 per lo studio della segnalazione di KCTD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCTD1 critici per la funzione di KCTD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCTD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCTD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCTD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCTD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCTD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCTD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.