KCNH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405756

Panoramica

KCNH1 codifica un canale del potassio voltaggio-dipendente (Kv10.1/Eag1) che regola il potenziale di membrana e il flusso di potassio, plasmando l’eccitabilità cellulare e la segnalazione a valle dipendente dal calcio. Oltre alle proprietà elettriche, l’attività di KCNH1 influenza la progressione del ciclo cellulare, la proliferazione e la dinamica del citoscheletro attraverso meccanismi di controllo bioelettrico e una modulazione del canale dipendente dalla fosforilazione. L’espressione di KCNH1 è stata riportata in contesti neurali e non neurali, collegando l’attività del canale a processi quali i pattern di scarica neuronale e la segnalazione dipendente dagli stimoli. La disregolazione di KCNH1 è associata a fenotipi neuroevolutivi ed è stata studiata nel contesto di segnali di crescita aberranti in biologia dei tumori, supportandone l’impiego in studi meccanicistici delle vie guidate dai canali ionici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNH1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCNH1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNH1 per lo studio della segnalazione di KCNH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNH1 critici per la funzione di KCNH1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCNH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCNH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCNH1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCNH1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.