JMJD5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405787

Panoramica

KDM8 codifica la proteina JMJD5 contenente il dominio Jumonji C, un’ossigenasi nucleare implicata nella regolazione della cromatina e nel controllo della trascrizione attraverso meccanismi associati all’idrossilazione/demetilazione della lisina istonica. JMJD5 è stata collegata alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress replicativo e al coordinamento di programmi di espressione genica che si intersecano con la segnalazione del danno al DNA e con l’adattamento metabolico. Attraverso queste funzioni, JMJD5 può influenzare vie associate alla proliferazione e stati epigenetici che risultano spesso alterati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da una dinamica della cromatina deregolata. Di conseguenza, KDM8/JMJD5 è ampiamente studiato come un nodo che connette la regolazione epigenetica a output trascrizionali dipendenti dal contesto e alla fitness cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KDM8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KDM8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KDM8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JMJD5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KDM8 per lo studio della segnalazione di JMJD5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KDM8 critici per la funzione di JMJD5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KDM8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JMJD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JMJD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KDM8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JMJD5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JMJD5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KDM8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KDM8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.