IRAP Plasmide Double Nickase (h): sc-403731-NIC

La leucil/cistinil aminopeptidasi (LNPEP), nota anche come aminopeptidasi responsiva all’insulina (IRAP), è una metallopeptidasi M1 dipendente dallo zinco che si localizza nei compartimenti endosomiali e partecipa al traffico di membrana regolato. Nelle cellule responsiva all’insulina, IRAP co-traffica con le vescicole di deposito di GLUT4 e viene mobilizzata verso la membrana plasmatica in seguito alla segnalazione PI3K–AKT, collegando LNPEP ai processi di captazione del glucosio e di riciclo vescicolare. IRAP contribuisce anche alla cross-presentazione degli antigeni attraverso la rifinitura dei peptidi negli endosomi, modellando i repertori peptidici dell’MHC di classe I e influenzando la sorveglianza immunitaria. Un’attività o un traffico di LNPEP/IRAP deregolati sono stati associati ad alterazioni dell’omeostasi metabolica e a contesti di segnalazione infiammatoria, rendendola rilevante per studi sull’azione dell’insulina, sulla proteolisi endosomiale e su vie immuno-correlate.

IRAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LNPEP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LNPEP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LNPEP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LNPEP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.