Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
IP Receptor Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404135
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IP Receptor Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IP Receptor, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IP Receptor Antibody (B-6): sc-515139
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IP Receptor Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404135 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PTGIR codifica il recettore umano della prostaciclina (IP), un recettore accoppiato a proteine G che lega la prostaciclina (PGI2) per regolare la segnalazione del cAMP e i programmi trascrizionali a valle dipendenti dalla PKA. L’attivazione del recettore IP modula il tono vascolare, la reattività piastrinica e il comportamento delle cellule muscolari lisce, integrando la biosintesi degli eicosanoidi con le vie dei secondi messaggeri dei GPCR. La segnalazione di PTGIR interagisce anche con i circuiti infiammatori e con l’omeostasi endoteliale attraverso la regolazione della produzione di citochine e della funzione di barriera. Un’alterata attività dell’asse prostaciclina–recettore IP è stata associata a fenotipi di disfunzione cardiopolmonare e vascolare, a supporto della sua rilevanza negli studi su trombosi, biologia vascolare polmonare e meccanismi delle malattie infiammatorie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IP Receptor (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTGIR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTGIR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTGIR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IP Receptor.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTGIR per lo studio della segnalazione di IP Receptor, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PTGIR critici per la funzione di IP Receptor
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTGIR per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IP Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IP Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTGIR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IP Receptor Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IP Receptor (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTGIR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTGIR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.