Integrin αM/CD11b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400563-ACT

ITGAM codifica l’integrina αM (CD11b), che eterodimerizza con ITGB2 (CD18) formando il recettore Mac-1/CR3, espresso prevalentemente sulle cellule mieloidi. Questo recettore di adesione e di riconoscimento di pattern regola il rolling leucocitario, l’adesione stabile e la transmigrazione, e modula fagocitosi, degranulazione e burst ossidativo tramite vie di segnalazione “outside-in” che coinvolgono chinasi della famiglia Src, Syk, PI3K-AKT e MAPK. L’integrina αM/CD11b riconosce anche bersagli opsonizzati dal complemento (iC3b) e contribuisce alla gestione dei complessi immuni e ai programmi di citochine infiammatorie. Alterazioni genetiche ed espressive di ITGAM sono associate a una deregolazione dell’attivazione dell’immunità innata e sono state studiate in contesti che includono autoimmunità, infiammazione cronica e biologia delle cellule mieloidi associate ai tumori.

Integrin αM/CD11b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGAM senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αM/CD11b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGAM nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGAM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αM/CD11b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGAM nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αM/CD11b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αM/CD11b nelle cellule tumorali con espressione di ITGAM silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.