Integrin β6/ITGB6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400999-ACT

ITGB6 codifica la subunità integrinica β6, che si associa all’integrina αV per formare l’eterodimero αVβ6, il quale media l’adesione delle cellule epiteliali ai ligandi della matrice extracellulare (ECM) e regola migrazione, polarità e rimodellamento tissutale. αVβ6 è un attivatore dipendente dal contesto del TGF-β latente attraverso interazioni con proteine contenenti il motivo RGD, collegando ITGB6 alla segnalazione TGF-β/SMAD, alla transizione epitelio-mesenchimale e ai programmi di riparazione delle ferite. Un’espressione aberrante di ITGB6 e la funzione di αVβ6 sono state associate a rimodellamento fibrotico e a invasione e metastasi associate al tumore in molteplici tumori epiteliali, nei quali può modulare il microambiente locale e la segnalazione infiammatoria. In quanto recettore di superficie che integra segnali dell’ECM con la segnalazione intracellulare, ITGB6 è spesso utilizzato per studiare la meccano-trasduzione, la comunicazione cellula–matrice e le risposte trascrizionali guidate dal TGF-β.

Integrin β6/ITGB6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGB6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β6/ITGB6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGB6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGB6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β6/ITGB6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGB6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β6/ITGB6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β6/ITGB6 nelle cellule tumorali con espressione di ITGB6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.