Integrin α2/ITGA2/CD49b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400913-ACT

ITGA2 codifica per l’integrina α2 (CD49b), un recettore di adesione che si associa all’integrina β1 per formare il complesso α2β1, uno dei principali recettori per collagene e laminina in molti tipi di cellule epiteliali, endoteliali e immunitarie. Collegando l’interazione con la matrice extracellulare alla segnalazione intracellulare, α2β1 regola l’assemblaggio delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e la meccanotrasduzione attraverso vie che includono FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. L’attività di ITGA2 influenza la migrazione cellulare, l’adesione piastrinica e il rimodellamento tissutale, e un’espressione o una funzione alterate sono state associate a fibrosi, risposte infiammatorie e invasione/metastasi delle cellule tumorali. In quanto recettore di superficie con output di segnalazione dipendenti dal contesto, ITGA2 è spesso studiato nella biologia della matrice extracellulare, nel crosstalk tra integrine e nei modelli di interazione cellula–matrice.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α2/ITGA2/CD49b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α2/ITGA2/CD49b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α2/ITGA2/CD49b nelle cellule tumorali con espressione di ITGA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.