IL-1RAcP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421101

Panoramica

Il1rap codifica per IL-1RAcP, un co-recettore essenziale che si associa ai membri della famiglia dei recettori dell’IL-1 per propagare i segnali avviati da IL-1α/IL-1β e da ligandi correlati. Dopo l’ingaggio del recettore, IL-1RAcP favorisce l’assemblaggio di complessi di segnalazione dipendenti da MyD88 che attivano le cascate IRAK–TRAF6, portando all’attivazione delle vie NF-κB e MAPK e dei programmi trascrizionali a valle che regolano l’infiammazione, le risposte immunitarie innate e la comunicazione tra stroma e comparto immunitario. Nei modelli murini, un’alterazione della segnalazione IL-1R/IL-1RAcP è spesso utilizzata per studiare i meccanismi che guidano stati infiammatori cronici, le risposte al danno tissutale e il rimodellamento amplificato dalle citochine in diversi sistemi d’organo. Poiché IL-1RAcP integra input provenienti da più membri della famiglia dell’IL-1, è rilevante per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione che modella il reclutamento leucocitario, la funzione di barriera e l’espressione genica infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RAcP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il1rap in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il1rap insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il1rap a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-1RAcP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il1rap per lo studio della segnalazione di IL-1RAcP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Il1rap critici per la funzione di IL-1RAcP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il1rap per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-1RAcP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-1RAcP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il1rap. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-1RAcP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-1RAcP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il1rap per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il1rap definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.