Ikaros Plasmide Double Nickase (h): sc-400530-NIC

IKZF1 codifica Ikaros, un fattore di trascrizione a dita di zinco che orchestra la specificazione delle linee ematopoietiche e la differenziazione delle cellule immunitarie regolando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. Ikaros integra input di segnalazione per controllare reti geniche coinvolte nello sviluppo linfoide, nella competenza della segnalazione del recettore delle cellule B, nella trascrizione responsiva alle citochine e nei checkpoint del ciclo cellulare. Attraverso il reclutamento di complessi di rimodellamento della cromatina e di modificazione degli istoni, influenza l’attività di enhancer e promotori nelle diverse fasi dello sviluppo. La disregolazione della trascrizione dipendente da IKZF1 è associata a un’alterata maturazione dei linfociti ed è spesso studiata nel contesto dei meccanismi delle malattie ematologiche e della riprogrammazione trascrizionale leucemogenica.

Ikaros Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IKZF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IKZF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IKZF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IKZF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.