IK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402139-NIC

Il gene umano **KCNN4** codifica **IK1 (KCa3.1)**, un canale del K+ attivato dal Ca2+ a conduttanza intermedia che collega i segnali di Ca2+ citosolico all’iperpolarizzazione di membrana e all’efflusso di K+. Modellando il potenziale di membrana e favorendo l’ingresso di Ca2+, IK1 influenza la segnalazione calcio-dipendente, la regolazione del volume cellulare e i programmi trascrizionali a valle che controllano proliferazione, migrazione e attivazione delle cellule immunitarie. L’attività di IK1 è comunemente studiata in vie che coinvolgono la regolazione Ca2+/calmodulina, l’ingresso di Ca2+ operato dai depositi (store-operated Ca2+ entry) e il rimodellamento del citoscheletro. Una funzione deregolata di KCNN4/IK1 è stata associata a processi infiammatori e immuno-mediati, al rimodellamento vascolare e a comportamenti di crescita alterati in diversi tipi cellulari, a sostegno della sua rilevanza per la modellizzazione meccanicistica delle malattie.

IK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNN4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNN4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNN4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNN4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.