Ig J Chain Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403642-ACT

Il gene umano **JCHAIN** codifica la catena J delle immunoglobuline, un piccolo polipeptide secreto necessario per la polimerizzazione di IgA e IgM e per la formazione di IgA dimeriche e IgM pentameriche. La catena J delle Ig supporta l’assemblaggio e la stabilità degli anticorpi multimerici e consente l’interazione con il recettore delle immunoglobuline polimeriche (PIGR), promuovendo il trasporto transepiteliale delle immunoglobuline secretorie e la difesa immunitaria delle mucose. La sua espressione è strettamente associata alla differenziazione delle cellule B in plasmacellule secernenti anticorpi ed è coordinata con la risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response) e con i programmi della via secretoria che permettono un’elevata produzione di immunoglobuline. Un’espressione deregolata di **JCHAIN** viene utilizzata come marcatore degli stati plasmacellulari ed è studiata in contesti quali immunodeficienza, infiammazione cronica e neoplasie delle cellule B/plasmacellule.

Ig J Chain Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JCHAIN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ig J Chain Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JCHAIN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JCHAIN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ig J Chain. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JCHAIN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ig J Chain nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ig J Chain nelle cellule tumorali con espressione di JCHAIN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.